自考生物技术概论06648复习资料（5）

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2．原因：①机械泡沫。②发酵泡沫。影响：减少发酵的有效容积、增加了染菌的机会；泡沫严重时，影响通气搅拌的正常进展，影响生产率。消泡方法：化学消泡和机械消泡。〔3分〕

1、单克隆抗体制备的原理与过程〔此题10分〕

答：原理：B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进展培养或注入小鼠体即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。〔4分〕

过程：

1〕免疫脾细胞的制备：制备单克隆抗体的动物多采用纯系Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾直接免疫法。〔1分〕

2〕骨髓瘤细胞的培养与筛选：在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选。骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养，融合前24h换液一次，使骨髓瘤细胞处于对数生长期。〔1分〕

3〕细胞融合的关键：1技术上的误差常常导致融合的失败。例如，供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。2融合试验最大的失败原因是污染，融合成功的关键是提供一个干净的环境，以与适宜的无菌操作技术。〔2分〕

4〕阳性克隆的筛选应尽早进展。通常在融合后10天作第一次检测，过早容易出现假阳性。检测方法应灵敏、准确、而且简便快速。具体应用的方法应根据抗原的性质，以与所需单克隆抗体的功能进展选择。常用的方法有RIA法、ELISA法和免疫荧光法等。其中ELISA法最简便，RIA法最准确。阳性克隆的筛选应进展屡次，均阳性时才确定为阳性克隆进展扩增。〔1分〕

5〕克隆化克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。克隆化应尽早进展并反复筛选。这是因为初期的杂交瘤细胞是不稳定的，有丢失染色体的倾向。反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株。〔1分〕

2、固定化酶有何优缺点？〔此题10分〕

答：优点：不溶于水，易于与产物别离；可反复使用；可连续化生产；稳定性好；酶反响过程可以加以严格控制；产物中没有酶的残留，简化了工业设备；可以增加产物的得率，提高产物的质量；酶使用效率高，本钱降低。〔5点与以上5分〕

缺点：固定化时，酶活力有损失；增加了固定化的本钱，在生产初期投资大；只能用于水溶性底物，而且较适用于小分子底物，对大分子底物不适宜；与完整菌体相比，不适于多酶反响；胞酶必须经过酶的别离过程。〔5点与以上5分〕